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        人血清蛋白与干扰素α-2b融合蛋白的定量和定性测定

        背景介绍


        利用人血清白蛋白融合技术,制备一种在体内半衰期长,生物学活性高的长效研究重组人血清白蛋白.干扰素α2b融合蛋白,可用于病毒性肝炎,肿瘤等相关疾病的治疗.重组人血清白蛋白‐干扰素α2b融合蛋白是一种新型、长效、具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节作用的细胞因子其半衰期较天然的干扰素α2b长且干扰素抗体的产生时间相对较晚在临床上对患者本次实验使用的样品为康宝集团客户提供的三个批次的重组人血清蛋白与干扰素α-2b融合蛋白样品(编号:rIFNα-2b-HAS 20161101、 rIFNα-2b-HSA 20161102手机下注、 rIFNα-2b-HSA 20161203)手机下注,主要进行蛋白的分离和定性定量实验手机下注。

        1.实验条件仪器:LUMEX  Capel 205毛细管电泳仪

        毛细管条件:长度42 cm,内径75 um

        分析波长:280 nm

        分析电压:15 kV

        分析温度:20℃

        进样条件:30 mbar进样10秒

        分析时间:9 min

        缓冲液:15 mmol磷酸盐缓冲液

        2.实验过程

        取HAS 20161101批样品手机下注,分别通过原液稀释2倍,4倍,8倍手机下注,16倍,共5个浓度浓度,浓度分别为236.25、472.5、945手机下注、1890和3780 mg/L。按照设置的条件进行分析,每个样品重复进样3次。

        空白:取水作为空白对照溶液。进样2次。按照此分析程序及条件,样品的图谱如下:下:

        从以上的结果图谱中可以看出,在所应用的条件下基本能够分析出样品手机下注,样品的迁移时间在7-8 min左右,三次进样的平行性非常好。

        通过不同浓度样品的浓度以及峰面积通过外标法进行标准曲线的绘制,仪器软件结果如下:

        图中可以看出,样品的曲线情况手机下注,线性系数R= 0.9995手机下注、0.9999和0.9995, 满足分析的要求,相对偏差比较小。

        此次换了毛细管和缓冲液进行分析,比之前时间晚一些。如果更换换柱子可能时间会有所不同,但是对分析影响不大。本条件是本次实验所应用,条件后期还应该可以进行优化和设置,可以采用不同的毛细管及SDS条件进行条件的优化。

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